Terwijl stratenmaker Mickey een romance met Minnie maakt, nemen Mickey's neven Morty en Ferdie de controle over zijn stoomwals over en deze gaat op volle snelheid vooruit op een zeer destructieve rit.
Een hen gaat met haar kuikens op bezoek bij de eend Donald Duck en het varken Peter Pig, om hulp te vragen bij het zaaien en oogsten van de maïs. Donald en Peter veinzen buikpijn te hebben, om zo onder het werk uit te kunnen komen. De hen besluit daarom maar zelf, met hulp van haar kuikens, de maïs te zaaien en oogsten. Als Donald en Peter later mee willen eten van de maïs en de maiskoeken die de hen ervan heeft gemaakt, krijgen ze tot hun grote frustratie van haar geen maïs maar een fles wonderolie, tegen de buikpijn.
De bende zit rond hun camping als een mug hun plezier bederft. En dan krijgt hij honderden van zijn vrienden en die veroorzaken echt problemen. Horace spuit er een paar in met stroop, wat een beetje helpt. Iedereen trekt zich terug in de tent, waar ze nog steeds gestoken worden, maar een beetje kunnen terugvechten. Uiteindelijk vangen ze alle muggen in een bloomer en sturen ze hen op pad.
De twee varkens die huizen van hooi en stokken bouwen, spotten met hun broer, die een stenen huis bouwt. Maar als de wolf langskomt en hun huizen omver blaast (nadat een list als het verkleden van een vondeling als schaap mislukt), rennen ze naar het huis van hun broer. En overal zingen ze het klassieke liedje “Who's Afraid of the Big Bad Wolf?
Mickey is een shovelmachinist en arbeider op een bouwplaats; Minnie bezorgt lunchpakketten; Pete is de voorman. Mickey heeft meer aandacht voor Minnie dan voor zijn werk en krijgt steeds ongelukken (meestal met de blauwdrukken die Pete vasthoudt). Pete steelt Mickey's lunch, dus biedt Minnie hem een lunch van het huis aan. Terwijl hij eet, ontvoert Pete Minnie; Mickey vecht tegen hem, maar het tij keert wanneer Minnie een lading hete klinknagels in Pete's broek dumpt...
Een jaloerse boomstronk bedreigt twee verliefde bomen door een bosbrand te veroorzaken. Als de regen komt en het vuur dooft, herleeft het bos en wordt de bruiloft gevierd.
Mickey en zijn vrienden organiseren een soort Olympische Spelen in een geïmproviseerd stadion op zijn boerderij. Het hoofdevenement is een soort quadrathlon, met hardlopen, polsstokhoogspringen, roeien en fietsen. Mickey krijgt een late start door vals spel van Pete, en dat is niet het enige vals spel.
Mickey komt op het podium onder het applaus van een onzichtbaar publiek en speelt verschillende klassieke deuntjes op de viool, na wat kleine ongelukjes. Tijdens een droevig lied wordt hij overmand door emoties en moet hij stoppen.
De klok slaat middernacht, de vleermuizen vliegen van de klokkentoren, een hond huilt bij volle maan en twee zwarte katten vechten op het kerkhof: een perfect moment voor vier skeletten om naar buiten te komen en een beetje te dansen.
Terwijl Tom Cat op jacht gaat, breken Mickey, Minnie en hun muizenvrienden zijn huis binnen en voeren muziek uit. Ze spelen verschillende deuntjes op de piano terwijl de andere muizen huishoudelijke voorwerpen raken die op de muziek zijn afgestemd.
Op 19 september 1928 ging de film Steamboat Willie van Walt Disney in première. Het was een van de eerste tekenfilms met geluid. Vaak is beweerd dat Mickey Mouse in Steamboat Willie zijn debuut maakte. Dat is echter niet waar. Het muisje was eerder in 1928, samen met zijn vriendinnetje Minnie, al te zien in de korte films Plane Crazy en The Gallopin’ Gaucho. Dit waren echter stille films, waardoor de bijna acht minuten durende tekenfilm Steamboat Willie wel de eerste film is waarin Mickey Mouse te horen was. Het stemgeluid van de muis kwam van niemand minder dan Walt Disney zelf. Later werd de stem van Mickey Mouse onder meer nog ingesproken door Jimmy MacDonald en Wayne Alwine. Na het succes van Steamboat Willie werd Plane Crazy nog een keer uitgebracht met geluid. In 1994 werd Steamboat Willie door cartoonkenners als dertiende opgenomen in de lijst van de vijftig beste cartoons aller tijden.
Oswald neemt een baan aan als badmeester om Miss Rabbit in de gaten te houden, die op haar beurt een bootongeluk ensceneert in de hoop dat Oswald haar komt redden.
Oswald, de conducteur van de trolley, wordt in de rails tegengehouden door een koe die weigert te bewegen. Vervolgens komt hij voor een steile heuvel te sataan, waar de trolley moeite mee heeft. Als hij eindelijk over de heuvel rijdt, raakt de trolley de controle kwijt. Kan de gelukkige konijnenpoot van Oswald hem redden?