 | Dakota Fanning als Fern Arable |
 | Julia Roberts als Charlotte the Spider (voice) |
 | Steve Buscemi als Templeton the Rat (voice) |
 | John Cleese als Samuel the Sheep (voice) |
 | Oprah Winfrey als Gussy the Goose (voice) |
 | Cedric the Entertainer als Golly the Goose (voice) |
 | Reba McEntire als Betsy the Cow (voice) |
 | Kathy Bates als Bitsy the Cow (voice) |
 | Robert Redford als Ike the Horse (voice) |
 | Thomas Haden Church als Brooks the Crow (voice) |
 | André 3000 als Elwyn the Crow (voice) |
 | Dominic Scott Kay als Wilbur (voice) |
 | Sam Shepard als Narrator (voice) |
 | Abraham Benrubi als Uncle the Pig (voice) |
 | Kevin Anderson als Mr. Arable |
 | Essie Davis als Mrs. Arable |
 | Siobhan Fallon Hogan als Mrs. Zuckerman |
 | Louis Corbett als Avery |
 | Robyn Arthur als Teacher |
| Julian O'Donnell als Henry Fussy |
 | Gary Basaraba als Homer Zuckerman |
 | Nate Mooney als Lurvy |
 | Nicholas Bell als Minister |
 | Beau Bridges als Dr. Dorian |
| Teague Rook als Well Dressed Man |
 | Julia Zemiro als Bystander |
| Denise Kirby als New Teacher |
| Robert Plazek als Ball Thrower |
| Joseph Lotesto als Young Boy |
| Michael Roland als Mayor |
 | Don Bridges als Announcer |
 | Ian Watkin als Fair Official |
 | Joel McCrary als Sheep Group (voice) |
 | Brian Stepanek als Sheep Group (voice) |
 | Fred Tatasciore als Sheep Group (voice) |
 | Bradley White als Sheep Group (voice) |
| Maia Kirkpatrick als Joy the Baby Spider (voice) |
| Jennessa Rose als Aranea the Baby Spider (voice) |
| Briana Hodge als Nellie the Baby Spider (voice) |
| Dale Azzopardi als Photographer (uncredited) |
| Geoff Burgess als Photographer (uncredited) |
 | Ella Scott Lynch als Girl at Fair (uncredited) |
| Greg Marian als Farmer (uncredited) |
| Stefano Mazzeo als Fair Member (uncredited) |
| Elizabeth Saunders als Girl at Fair (uncredited) |
| Danny Elfman | Original Music Composer |
| Ellen Lewis | Casting |
| Bernard Williams | Executive Producer |
| Seamus McGarvey | Director of Photography |
| David Rubin | Casting |
| Rita Ryack | Costume Design |
| Susannah Grant | Author |
| Gary Winick | Director |
| John Kasarda | Art Direction |
| Stuart Wurtzel | Production Design |
| Sabrina Plisco | Editor |
| Karey Kirkpatrick | Author |
| Jordan Kerner | Producer |
| Julia Pistor | Executive Producer |
| Earl Hamner, Jr. | Author |
| E.B. White | Author |
| Paul Neesan | Executive Producer |
| Edgar M. Bronfman | Executive Producer |
| Susan Littenberg | Editor |
| Tony Winley | Producer |
| Tom Nursey | Art Direction |
| Lisa Thompson | Set Decoration |
| Daniel Fotheringham | Animation |
| Howard R. Campbell | Lighting Technician |
| Owen Klatte | Animation |
| Jeremy Stewart | Animation |
| Bruce Shapiro | Dialogue Coach |
| Trudy Talbot | Production Accountant |
